細胞培養(yǎng)環(huán)境主要要求：無菌無毒。

創(chuàng)造局部無菌最簡便的方法：使用超凈工作臺或生物安全柜。

細胞無菌室要求：

①密封的房間、有空調(diào)過濾機組和通風(fēng)系統(tǒng)

②有更衣室、風(fēng)淋室、緩沖間

③無菌室使用前后需經(jīng)過紫外燈輻照30分鐘消毒殺菌

④人員、物品進入無菌室也需相應(yīng)的消毒處理

根據(jù)空氣潔凈度不同，無菌室分為百級、千級、萬級、十萬級和三十萬級。根據(jù)2010版GMP規(guī)定，無菌室分為A級、B級、C級、D級。細胞培養(yǎng)過程中常用設(shè)備：

電子天平

結(jié)構(gòu)簡單，稱量的原理和秤原理是一樣的，和秤不同的是，電子天平量程小，精準(zhǔn)度高。

PH計

結(jié)構(gòu)由機體和電極筆構(gòu)成；電極筆內(nèi)部參比液是3mol/L的氯化鉀，保護液是飽和氯化鉀溶液。

純水機

由過濾柱、反滲透膜、數(shù)顯控制板組成，純水機可制得蒸餾水和超純水。

高溫高壓滅菌鍋

滅菌原理：密閉環(huán)境，加熱產(chǎn)生水蒸汽，鍋內(nèi)冷空氣經(jīng)排氣閥排出后，關(guān)閉排氣閥，由于水蒸汽無法排出，鍋內(nèi)壓力增加，沸點升高，形成高溫環(huán)境，菌體蛋白質(zhì)變性，從而達到滅菌的效果。

二氧化碳培養(yǎng)箱

結(jié)構(gòu)：與普通生化培養(yǎng)箱相比，增加了密封性，通入CO2氣體。CO2氣體由外接氣瓶連接。

注意事項：

①氣瓶上有兩個氣壓表，右邊氣壓表是指氣瓶內(nèi)壓力，左邊氣壓表是進入到培養(yǎng)箱內(nèi)氣壓。

②培養(yǎng)箱參數(shù)是設(shè)置好的，分別是37℃，5%CO2。

③培養(yǎng)箱內(nèi)有飽和硫酸銅溶液水盆，應(yīng)定期加入無菌水，定期更換飽和硫酸銅溶液。

倒置顯微鏡

結(jié)構(gòu)：倒置顯微鏡與普通的光學(xué)顯微鏡在結(jié)構(gòu)上相反，光圈在上面，物鏡在載物臺下面。

使用步驟：

①打開電源開關(guān)，調(diào)節(jié)光圈亮度

②避開物鏡用酒精棉球擦拭載物臺

③培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿可以直接放在載物臺上觀察細胞

④使用結(jié)束后，光圈調(diào)至最暗，關(guān)上電源，蓋上防塵布。

超凈工作臺

超凈工作臺僅適于制備培養(yǎng)基和其他無菌試劑及培養(yǎng)非靈長類細胞

根據(jù)氣流方向分為水平流超凈工作臺和垂直流超凈工作臺，我們實驗室使用的超凈工作臺是垂直流超凈工作臺。

生物安全柜

根據(jù)氣流方向和排風(fēng)系統(tǒng)分為三級生物安全柜，實驗室使用的是2級生物安全柜。

生物安全柜和超凈工作臺的區(qū)別：

生物安全柜能夠完全保護工作人員、樣品并防止交叉污染的發(fā)生；

超凈工作臺只是保護操作對象而不保護工作人員和實驗室環(huán)境的潔凈工作臺。

液氮罐

液氮罐一般分為液氮貯存罐和液氮運輸罐。

主要用于低溫貯藏細胞和菌株凍存管，液氮溫度低至-196℃，使用過程需做好防護措施。

超低溫冰箱

本實驗室超低溫冰箱主要用于細胞、菌株凍存及短期保藏，設(shè)置溫度為-80℃，高溫報警溫度為-73℃，低溫報警溫度為-85℃。