細胞在體外培養(yǎng)過程中需要每天進行常規(guī)檢查和顯微鏡觀察，及時了解細胞生長狀態(tài)、數(shù)量改變、細胞形態(tài)、細胞有無移動、有無污染、培養(yǎng)液pH是否變酸、變黃是否更換等。細胞常規(guī)檢查觀察的內(nèi)容為：
一、肉眼觀察
一般常規(guī)檢查用肉眼即可觀察，主要看培養(yǎng)液的顏色和透明度的變化。正常情況下，培養(yǎng)液pH介于7.2～7.4之間，呈桃紅色清亮透明。加入細胞在培養(yǎng)瓶中置一般溫箱培養(yǎng)時，隨著細胞生長時間的延長，細胞代謝產(chǎn)生的酸性產(chǎn)物會使培養(yǎng)液pH值下降，引起顏色變淺變黃。在超越緩沖范圍后培養(yǎng)液酸化變黃，如不及時調(diào)節(jié)pH，會影響細胞的生長，甚至造成細胞退變死亡。所以，一旦發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液變黃，應(yīng)及時換液傳代。一般更換培養(yǎng)液的時間，依營養(yǎng)物的消耗而定，正常情況生長穩(wěn)定的細胞2～3天換液一次，生長緩慢的細胞3～4天換液一次。培養(yǎng)液中加Hepes或用5%CO2溫箱培養(yǎng)可使pH維持穩(wěn)定，利于細胞生長。用含磷酸鹽緩沖系統(tǒng)培養(yǎng)時，可因瓶及塞子漏氣，CO2溢出，也可能由于培養(yǎng)瓶塞洗刷不潔、殘留堿性物，使培養(yǎng)液變堿發(fā)紅，只致使細胞難以生長，甚至死亡。細胞換液傳代后，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液很快變黃，要注意是否有細菌污染或培養(yǎng)器皿沒有洗干凈。貼壁細胞培養(yǎng)時若出現(xiàn)混濁，多為污染。懸浮培養(yǎng)的細胞，應(yīng)將瓶豎起靜置1小時，若培養(yǎng)基混濁示為污染，也可在顯微鏡下仔細觀察有無污染現(xiàn)象出現(xiàn)。
二、顯微鏡觀察
生長良好的細胞，在顯微鏡下可觀察到細胞透明度大，折光性強，輪廓不清。相差顯微鏡觀察時可見細胞部分細微結(jié)構(gòu)。若細胞生長狀態(tài)不良，可見細胞輪廓增強，細胞折光性變?nèi)?，細胞胞質(zhì)中出現(xiàn)空泡、脂滴和其他顆粒狀物質(zhì)，細胞之間空隙增大，細胞形態(tài)不規(guī)則，甚至失去原有細胞的特點，產(chǎn)生圓縮脫落，有時細胞表面及周圍出現(xiàn)絲絮狀物。若細胞營養(yǎng)不良狀況沒有得到及時糾正，進一步發(fā)展可見到部分細胞死亡，崩解漂浮在培養(yǎng)液中。發(fā)現(xiàn)這種情況應(yīng)及時處理，只有生長良好的細胞才能進行傳代培養(yǎng)和實驗研究。
三、細胞的生長狀態(tài)
細胞培養(yǎng)時，經(jīng)初代培養(yǎng)或傳代培養(yǎng)，都有一長短不同的潛伏期，在培養(yǎng)過程中注意觀察細胞增殖生長的狀態(tài)極為重要。各種細胞增殖的時間不盡一致。傳代細胞系，胚胎組織或幼體細胞潛伏期短，一般在接種培養(yǎng)第二天即可見細胞生長增殖，3～4天便可連接成片。成體組織的潛伏期長，老年組織和癌組織潛伏期更長，可達一周左右。原代細胞培養(yǎng)中最先可見從組織塊中邊緣“長出”細胞，這種細胞是從原代組織塊中游走出來的，并不是細胞增殖產(chǎn)生。這種早期游出的細胞多以成纖維細胞為主，其易生長，適應(yīng)性強，呈放射狀或旋渦狀分布，很快生長并互相連接成網(wǎng)狀。傳代細胞在傳代后，一般經(jīng)過懸浮、貼壁伸展很快進入潛伏期，對數(shù)生長期，細胞大量繁殖，逐漸相連成片而長滿瓶底。一旦發(fā)現(xiàn)細胞長滿瓶底80%就應(yīng)及時傳代，否則會影響細胞生長甚至脫落。懸浮細胞當發(fā)現(xiàn)生長顯著、密度增大、分布稠密、培養(yǎng)液變黃時也應(yīng)及時傳代。
四、微生物污染
細胞接種、傳代、換液加藥后應(yīng)經(jīng)常觀察，密切注意是否有微生物污染發(fā)生。一旦發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液混濁、液體內(nèi)漂浮著菌絲或細菌，或生長明顯變緩，胞質(zhì)內(nèi)顆粒增多，有中毒表現(xiàn)等應(yīng)懷疑是否有微生物污染，進一步觀察檢查并及時處理。
